微生物样品采集与保存操作规程

● 微生物样品采集与保存操作规程

1、普通土壤样本采集

根据研究目的确定采样范围，取样器具要事先消毒灭菌处理，开始采样，去除表面浮土，使用乙醇火烧的铲子挖取地下5~20cm的土层，去除可见杂质后，土壤过2mm筛网，每个样品从3个及以上采样点采集并混合而成，去除杂质之后的样品每管可收集分装3g~5g，保存于无菌离心管中，置于0℃以下运回实验室，用于抽提DNA，如不能马上实验，置于-80℃保存。土壤样品强烈建议使用5ml EP或15ml、50ml离心管进行装载，并用封口膜封口，使用自封袋容易撒漏导致样品交叉污染。

2、根际土壤样本采集

使用的工器具要事先消毒灭菌处理，采集20cm深的根际土壤于50mL的无菌管里，迅速放在液氮里储存，用20目的筛子过筛，去除植物根、动物残骸以及其他杂质后分装到无菌离心管里，每管3~5g，密封后立即-80℃储存备用。

3、水体样本采集

根据研究目的确定采样深度和范围，采集好的水样需要通过滤膜进行过滤，可以根据水样的浑浊程度选择相应孔径的滤膜，之后-80℃保存备用。

清洗水样：可选择小孔径的滤膜，一般选0.22μm或0.45μm的滤膜，过滤水样体积大于10L；

浑浊水样：过滤前静置分离悬浮颗粒，也可以用大孔径的滤膜预过滤一遍，再用小孔径的滤膜进行过滤。

水样过滤之后，可将微生物富集的滤膜装在 50ml 离心管中（滤膜面积不应过大，取直径 3-4cm 富含微生物的部分即可），或使用缓冲液洗脱滤膜，将洗脱后的缓冲液置于离心管中并用封口膜封口，公司不接受大体积未过滤的水样。